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熒光分光光度計的操作步驟
點擊次數(shù):574 更新時間:2024-06-20
熒光分光光度計是一種定性、定量分析的儀器。通過熒光光譜儀的檢測,可以獲得物質(zhì)的激發(fā)光譜、發(fā)射光譜、量子產(chǎn)率、熒光強度、熒光壽命、斯托克斯位移、熒光偏振與去偏振特性,以及熒光的淬滅方面的信息。
熒光分光光度計的操作步驟:
1.開機:接通電源,打開主機開關(guān),點燃(打開)光源后,根據(jù)說明書要求啟動計算機。
2.檢測前準(zhǔn)備:參照儀器說明書,在20天內(nèi)至少進(jìn)行一次激發(fā)校準(zhǔn)和發(fā)射校準(zhǔn),檢測前儀器應(yīng)預(yù)熱。
3.工作條件的選擇:環(huán)境溫度應(yīng)在20°C土5°C;相對濕度不大于70%;電源穩(wěn)定,無磁場、電場干擾。根據(jù)樣品的特性及熒光強度,選擇合適的儀器工作條件(如狹縫、PM增益、響應(yīng)時間等)。
4.基本測定
(1)熒光激發(fā)光譜測定
設(shè)置儀器參數(shù),掃描發(fā)射波長,找到maxhem,以此為發(fā)射波長,記錄發(fā)射強度作為激發(fā)波長的函數(shù),便得到激發(fā)光譜。
(2)英光發(fā)射光譜測定
設(shè)置儀器參數(shù),掃描激發(fā)波長,找到maxhex以此為激發(fā)波長,記錄發(fā)射強度與發(fā)射波長間的函數(shù)關(guān)系,便得到熒光發(fā)射光譜。
(3)差譜測定
設(shè)置儀器參數(shù),選擇合適的工作方式,測定背景溶液的發(fā)射光譜并儲存起來,在一定的工作方式下掃描樣品溶液的發(fā)射波長,得到當(dāng)時的光度值和儲存的背景值之間的差示值,即差譜。
(4)峰面積積分
選擇適當(dāng)?shù)墓ぷ鞣绞剑瑢悠啡芤哼M(jìn)行積分操作,即得到峰面積積分。
(5)熒光強度
選擇合適的測量參數(shù),設(shè)置入ex、hem,采用定點讀數(shù)或掃描方式,即可測得所選波長處的熒光強度。
(6)定量測定
配制一系列已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液,在一定的測定條件下,設(shè)置入ex、入em,按照由稀至濃的次序,測定標(biāo)準(zhǔn)溶液的熒光強度,繪制熒光強度一濃度的工作曲線,不改變儀器參數(shù)測定未知溶液的熒光強度由工作曲線即可求出未知溶液的濃度。