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冷凍超薄切片原理和使用
冷凍超薄切片技術(shù)是一種為了研究更接近于生物生活狀態(tài)結(jié)構(gòu)和功能而發(fā)展起來(lái)的電鏡樣品制備技術(shù)。它是把樣品進(jìn)行冷凍固定后,進(jìn)行超薄切片,省去了經(jīng)典超薄切片法的長(zhǎng)時(shí)間的固定、脫水和也埋等處理。下面給大家介紹冷凍超薄切片機(jī)操作,冷凍超薄切片的制備程序可為兩類(lèi),我們一起看看吧。
1.無(wú)溶液制備法:包括取材、快速冷蹤、冷凍替代
、切片、干燥、染色或不染色、鏡檢等幾個(gè)步驟。主要用于可溶性物質(zhì)的放射白顯影和X射線微區(qū)分析。
2.固定樣品制備法:包括取材、醛類(lèi)闌定、樣品包埋或不包埋、冷凍保護(hù)處IR、快速冷凍切片、染包及鏡檢等步驟。適用于進(jìn)行形態(tài)學(xué)、細(xì)胞化學(xué)和免疫細(xì)胞化學(xué)研究。
用戶經(jīng)培訓(xùn)后取得資格可自行使用超薄切片機(jī),使用步驟如下:
1)開(kāi)機(jī)
2)檢查是否處于切片模式,檢查頂光底光是否亮度正常;
3)將包埋塊放入適當(dāng)夾頭并用六角扳手旋緊,以固定包埋塊;(然后將夾頭安裝在修快臺(tái)進(jìn)行修快);
4)將夾頭放入機(jī)械臂,并用手旋好螺絲上緊夾頭(不可用六角扳手);
5)將玻璃刀/鉆石刀安裝在刀臺(tái)上,用手旋好螺絲以固定刀,并注意檢查刀臺(tái)是否固定于底座上;
6)檢查刀間隙角,調(diào)整刀臺(tái)角,選擇適當(dāng)?shù)膴A頭角度等;
7)設(shè)定切片窗口(上下范圍);
8)對(duì)刀;
9)選擇所用切片速度和厚度;
10) 在刀槽內(nèi)注水,注意水面平整;
11) 切片、撈片;
12) 關(guān)機(jī)、清理切片機(jī),拿走個(gè)人物品,保持切片臺(tái)面整潔;
13) 登記使用記錄。